凝胶过滤原理
凝胶过滤,也被称为分子筛层析或排阻层析,是一种利用分子大小差异进行分离的层析技术。其核心原理如下:
1. 凝胶结构 :凝胶过滤所使用的介质通常是具有多孔网状结构的凝胶珠,内部孔径大小固定。
2. 分子筛作用 :不同大小的分子通过凝胶珠的孔径时,会有不同的阻滞作用。小分子能够进入凝胶珠内部,而大分子则被排除在外。
3. 洗脱过程 :在洗脱过程中,大分子物质由于其体积较大,会随着洗脱液从凝胶珠间隙流出,而小分子物质在凝胶珠内部孔道中穿来穿去,因此洗脱体积较大,洗脱速度较慢。
4. 分离效果 :由于大分子物质首先被洗脱,小分子物质随后被洗脱,因此可以实现根据分子大小的不同将混合物中的组分分离。
需要注意的是,使用凝胶过滤法进行分子量测定时,要求待测蛋白质与标准蛋白质具有相同的分子形状(接近球体),否则可能无法得到准确的分子量结果。此外,凝胶过滤柱的成本较高,且整个实验过程耗时较长
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